蘋果酸脫氫酶

一、產(chǎn)品介紹

二、酶活測(cè)定方法

1.     原理

                              malate dehydrogenase

Oxaloacetate + NADH + H⁺     ———→     L-Malate  + NAD⁺

2. 酶活定義

1個(gè)酶活單位等于在以下反應(yīng)條件下1分鐘生成1微摩爾NAD⁺所用的酶量。

3. 檢測(cè)方法

3.1樣品稀釋液的配制

在800毫升去離子水中，加入5.8克Tris、20克L-天冬氨酸、1.5克 EDTA的二鉀鹽，2克牛血清白蛋白，攪拌溶解，用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH到7.50，定容至1升。

3.2酶活檢測(cè)試劑配制方法

3.2.1 配制 A液

A液為0.1M的 pH為7.50的磷酸鉀緩沖液。

3.2.2配制B液（草酰乙酸溶液）

    在冰水浴中，取100毫升A液，其中加入200mg草酰乙酸，攪拌溶解。此液極其不穩(wěn)定，需要新鮮配制，當(dāng)天配制當(dāng)天使用，并且要放置在冰水中。

3.2.3配制C液（NADH溶液）

取A液100毫升，在其中加入0.6毫摩爾的NADH,攪拌溶解。此液需要當(dāng)天配制當(dāng)天使用，并且要放置在冰水浴中。

3.2.4待測(cè)樣品的配制

檢測(cè)前用臥氏稱量管稱量所需酶。稱量時(shí)，應(yīng)至少稱量10mg的酶，以保證稱量的準(zhǔn)確性。用酶稀釋液溶解，定容到配制體積。

3.2.5酶活檢測(cè)步驟

用島津分光度計(jì)依次加入A液0.840ml、B液0.030ml、C液0.030ml，混勻，保溫2分鐘，使反應(yīng)體系溫度達(dá)到30度，再加入0.015ml待測(cè)樣品，混勻。在340nm條件下檢測(cè)15-55秒的吸光度變化。K值為9807。該檢測(cè)方法的線性是800-8000U/L。

3.2.6酶活力計(jì)算公式

酶活力（U/L）=  △A/min×Vt× D×1000  =△A/min×9807×D

ε×Vs×d