外觀：	白色無定形粉末
比活性：	≥40U/mg
穩(wěn) 定性：	-20℃至少穩(wěn)定一年
分子量：	116.5KD
等電點(diǎn)：	5.28
米氏常數(shù)：	4.33×10^-4M (2-Nitrophenyl-β-D-galactoside)
抑制劑：	不受疊氮鈉的抑制
pH穩(wěn)定性：	5.0～9.5 （Fig. 1）
最適 pH：	7.5 （Fig. 2）
最適溫度：	55℃ （Fig. 3）
熱穩(wěn)定性：	50℃以下穩(wěn)定（含1mM MgCl₂）（Fig. 4）

二、酶活測定方法

1. 檢測原理

2. 酶活定義

一個酶活單位等于在檢測條件下每分鐘轉(zhuǎn)換(水解) 1.0μmol底物（O-硝基酚β-D-半乳糖苷）的酶量。

3. 檢測方法

3.1 酶活檢測試劑配制方法

3.1.1 試劑A的配制

100mM，pH 7.3的磷酸鈉緩沖液。

3.1.2 試劑B的配制

3.36M β-巰基乙醇：將4ml β-巰基乙醇用水稀釋至17ml（現(xiàn)配現(xiàn)用）。

3.1.3 試劑C的配制

30mM 氯化鎂溶液：將610mg MgCl₂·H₂O溶于80ml水，使用1M NaOH調(diào)pH至7.3，定溶至100ml。

3.1.4 試劑D的配制

22.7mM O-硝基酚β-D-半乳糖苷溶液：將137mg ONPG溶于20ml試劑A（0-5℃可保存1周）。

3.1.1 試劑E的配制

測活試劑：將試劑A，試劑B，試劑C按照8：1：1的比例混合。

3.1.2 試劑F（酶稀釋液）的配制

酶稀釋液：50mM pH7.3的磷酸鈉緩沖液，含1.0mM MgCl₂，0.1% BSA。

3.1 待測樣品的配制

檢測前用臥氏稱量管稱量所需酶，酶稱量時，應(yīng)至少稱量10毫克的酶，以保證稱量的準(zhǔn)確性。用酶稀釋液溶解，定容到配制體積，室溫放置1小時。測定前使用酶稀釋液(F)稀釋至100-1000U/L。

3.2 酶活檢測步驟

1、0.520ml試劑E與0.02ml稀釋好的酶液在37℃保溫1分鐘。

2、加入0.06ml試劑D，37℃反應(yīng)4分鐘。記錄吸光值，計(jì)算第3分鐘到第4分鐘的單位時間吸光度變化（△OD₄₀₅/min _（_test_））。

3、重復(fù)第1、2步驟，用20微升的酶稀釋液代替酶液。計(jì)算單位時間吸光值變化（△OD₄₀₅/min _（_blank_））。

注意：此法酶的最適線性為100-1000 U /L。

3.3 酶活力計(jì)算公式

酶活力（U/L）=

酶比活力（U/mg）=

三、附圖

未找到相應(yīng)參數(shù)組，請于后臺屬性模板中添加

暫未實(shí)現(xiàn),敬請期待

關(guān)鍵詞

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶

IVD原料